Tên đề tài: Nghiên cứu sản xuất vắc-xin phòng bệnh do E.coli sinh độc tố đường ruột (ETEC) gây ra trên lợn
Tổ chức chủ trì: Viện Thú y
Cơ quan chủ quản: Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn
Chủ nhiệm đề tài: TS. Võ Thành Thìn
Các cá nhân tham gia đề tài: ThS. Lê Đình Hải, ThS. Đặng Văn Tuấn, TS. Vũ Khắc Hùng, ThS. Nguyễn Hữu Tình, ThS. Nguyễn Thị Thắm
Thời gian thực hiện: 1/2016-12/2018
Kinh phí thực hiện: 3.400 triệu đồng
Cấp phê duyệt: Quyết định 627/QĐ-BNN-KHCN ngày 25 tháng 02 năm 2019 của Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp và PTNT
Ngày phê duyệt: ngày 12 tháng 03 năm 2019 tại Khánh Hòa
Kết quả nghiên cứu:
Nghiên cứu đánh giá sự tương đồng gen mã hóa độc tố đường ruột STa, STb, LT của các chủng ETEC phân lập từ lợn tiêu chảy ở Việt Nam và chọn được chủng đại diện EcoPV-173 là nguồn lưu trữ gen trong nghiên cứu. Bằng các kỹ thuật sinh học phân tử, đã tạo được đoạn gen tái tổ hợp SLS mã hóa đồng thời 3 độc tố đường ruột STb, LTB, STb. Chọn được 2 chủng vi khuẩn đại diện là SLS234 và SLS321 có khả năng biểu hiện tốt protein độc tố đường ruột tái tổ hợp (protein SLS) với trọng lượng phân tử khoảng 21kDa. Điều kiện nuôi cấy tối ưu để chủng SLS321 biểu hiện SLS cũng đã được xác định là nuôi cấy trong môi trường 2xYT ở 30°C; lắc 150 vòng/phút; bổ sung chất cảm ứng IPTG khi mật độ tế bào trong môi trường (giá trị OD600) đạt 0,6; nồng độ IPTG cuối cùng là 1mM và thu hoạch vi khuẩn khoảng 12 giờ sau khi tiếp giống (vi khuẩn bắt đầu phát triển đến pha cân bằng).
Protein SLS được tinh chế trên hệ thống sắc ký ái lực, sử dụng cột HisTrap HP với độ tinh sạch 100% và không thể hiện độc tính trên chuột nhắt trắng sơ sinh. Hơn nữa, protein SLS an toàn, có tính kháng nguyên mạnh, liều miễn dịch trên chuột nhắt trắng là 40µg/con, trên lợn là 40µg/con; có thể sử dụng kháng nguyên này kết hợp với chất bổ trợ nhôm hydroxyt (20%) để tiêm dưới da hoặc tiêm bắp thịt; ngưỡng hiệu giá kháng thể bảo hộ 100% chuột nhắt trắng và lợn là 6 log2 (phương pháp ELISA).
Sản xuất thành công vắc-xin protein độc tố đường ruột tái tổ hợp (vắc-xin Coli RE I.Vac) với chất bổ trợ là nhôm hydroxyt (20% v/v), nồng độ kháng nguyên (protein SLS) là 400 40µg/ml. Liều vắc-xin trên chuột nhắt trắng là 0,1 ml/con, trên lợn là 1 ml/con. Vắc-xin Coli RE I.Vac đạt các chỉ tiêu vô trùng, an toàn (100%), hiệu lực (100%) trên chuột nhắt trắng và lợn. Thời gian duy trì kháng thể đủ bảo hộ trong huyết thanh lợn tối thiểu là 6 tháng, thời hạn sử dụng vắc-xin tối thiểu là 12 tháng.
(Nguồn: Thư viện Bộ Nông nghiệp và PTNT-DT20195620-22)
